크로마토그래피 레진(Chromatography resin)이란?

단일클론항체(mAb), 항체 절편(fragment), 백신과 같은 생체 분자를 정제하는 데 사용되는 솔루션입니다. 화학적으로 서로 연결된 작은 다공성 비드(bead)를 함유하는 겔로, 비드의 구멍은 용출액으로 채워져 있고 다양한 크기를 띕니다. 컬럼 안에 패킹된 크로마토그래피를 위한 고정상(stationary phase)으로, 보통 다공성(porous)의 기본 매트릭스(base matrix)로 구성됩니다. 레진의 기본 매트릭스는 보통 크로마토그래피의 타겟 화합물과 결합할 수 있는 리간드(ligand)와 커플링함으로써 기능화됩니다.

일반적인 단백질은 결합 특이성, 전하, 소수성, 크기와 같은 특성들을 지니며, 이러한 특성들을 여러가지 크로마토그래피 기법에 적용할 수 있습니다.

싸이티바(Cytiva)는 크로마토그래피 기법에 따른 다양한 종류의 레진 제품을 제공합니다.

■ 제품 특징

소수성 상호 작용 크로마토그래피(Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC)란?

소수성 상호 작용 크로마토그래피는 단백질의 소수성 차이에 따라 단백질을 분리하는 크로마토그래피 기법입니다. 단백질의 분리는 단백질과 크로마토그래피 레진의 소수성 표면 간의 가역적인 상호작용에 기초합니다. 이 상호작용은 높은 이온 강도를 가진 버퍼에 의해 향상되며, 그로 인해 소수성 상호 작용 크로마토그래피는 황산암모늄으로 침전되었거나 이온 교환 크로마토그래피로 고염에 용출된 단백질 정제를 위한 이상적인 ‘다음 단계’가 됩니다.

이온 강도가 높은 용액(예를 들면, 1.5 M NH2SO4) 내의 시료는 컬럼 내로 주입되자 마자 결합하게 됩니다. 그 후 조건이 변화되면 결합된 물질이 차별적으로 용출 됩니다. 용출은 주로 염 농도 감소에 의해 이루어집니다. 아래 그림과 같이 가장 일반적으로 황산암모늄의 감소 구배로 샘플을 용출 시킵니다. 표적 단백질은 결합되는 동안 농축되며, 정제되고 농축된 형태로 회수됩니다. 다른 용리 과정도 이용 가능합니다.

소수성 상호 작용 크로마토그래피의 특징

소수성 상호 작용 크로마토그래피는 단백질 분리 정제의 모든 단계에서 사용할 수 있으며, 다른 기술인 이온 교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피와 보완적으로 사용됩니다.

일반적으로 소수성 상호 작용 크로마토그래피는 Intermediate 또는 Polishing 단계에 주로 사용됩니다.?

소수성 상호 작용 크로마토그래피의 주요 장점으로는 농축 능력, 높은 선별력과 회수율 그리고 샘플 로딩 능력이 있습니다.

농축이란 희석된 많은 양의 샘플이 소수성 상호 작용 크로마토그래피 레진을 통과한 후 훨씬 적은 양으로 용출하는 것을 의미합니다.

높은 선별력과 회수율을 통해서 소수성(Hydrophobicity) 내의 작은 차이들을 분별할 수 있으며, 비교적 많은 양의 샘플을 로딩할 수 있습니다.

소수성 리간드의 선택

구배 용출 시 최적의 분리를 위해 컬럼의 총 결합 용량의 약 1/5 정도를 사용합니다. HIC는 시료의 양에 구애받지 않는 결합 방법입니다.

컬럼의 선택

HIC를 이용할 때 소수성 리간드 뿐 아니라 크로마토그래피의 매트릭스도 선택성에 영향을 줍니다.
요구되는 규모에서의 시료 용해도, 정제의 규모, 올바른 리간드의 유용성과 같은 지표들을 고려해야 합니다.

적절한 컬럼을 찾고 실험 방법을 최적화하기 위해 HiTrap™ HIC Selection Kit나 RESOURCE™ HIC Test Kit를 사용합니다.

시료 조제

시료는 출발 버퍼(starting buffer)과 같은 pH를 가져야 하며, 이온 강도가 높은 용액 내에 있어야 합니다. 또한 입자상 물질(미세 먼지)이 없어야 합니다.

버퍼 조제

만일 소수성 특성이 알려져 있지 않다면, 다음의 조건을 먼저 시도해봅니다.

Start buffer (A): 50mM Na₂HPO₄ X 2H₂O pH 7,0 + 1.0M ammonium sulphate
Elution buffer (B): 50mM Na₂HPO₄ X 2H₂O pH 7,0
Gradient: 0-100% in 10-20 column volumes

- 추천 제품 : Capto™, Sepharose™ Fast Flow

■ 제품 선택 가이드

카달로그

제목	첨부파일
Cytiva 크로마토그래피 컬럼 & 레진 국문 종합카탈로그	보기 다운로드
Cytiva 바이오프로세스 크로마토그래피 레진 선택 가이드_국문	보기 다운로드
Hydrophobic Interaction Chromatography (HIC) Selection Guide	보기 다운로드
Cytiva Lab scale 크로마토그래피 컬럼,레진 선택 가이드_국문	보기 다운로드

제목
Cytiva 크로마토그래피 컬럼 & 레진 국문 종합카탈로그

첨부파일
보기 다운로드
제목
Cytiva 바이오프로세스 크로마토그래피 레진 선택 가이드_국문

첨부파일
보기 다운로드
제목
Hydrophobic Interaction Chromatography (HIC) Selection Guide

첨부파일
보기 다운로드
제목
Cytiva Lab scale 크로마토그래피 컬럼,레진 선택 가이드_국문

첨부파일
보기 다운로드

응용자료

제목	첨부파일
응용자료 정보가 없습니다

응용자료 정보가 없습니다

동영상

동영상 정보가 없습니다

동영상 정보가 없습니다

FAQ

목록으로